Главная святыня монастыря – святые мощи Небесного покровителя обители, преподобного отца нашего Давида, игумена Вознесенского, Серпуховского чудотворца (2, 31 октября и 23 мая (обретение мощей)), ныне почивают в Знаменском храме пустыни.

Преподобный Давид, по преданию, происходил из рода князей Вяземских и носил в миру имя Даниил.  Еще будучи юношей,  чуть более двадцати лет от роду, почувствовал Даниил призвание к подвижнической жизни и пришел в Пафнутиев Боровский монастырь. Этот монастырь во имя Рождества Пресвятой Богородицы основан преподобным Пафнутием Боровским в 1444 году. Он был обильным вертоградом иночества и христианского просвещения, из него вышли многие светильники русского монашества. Преподобный Пафнутий являлся пострижеником и учеником преподобного Никиты, третьего настоятеля Серпуховского Высоцкого монастыря. Преподобный же Никита был сродником и учеником Преподобного Сергия Радонежского,  Игумена земли Русской. Таким образом, преподобный Пафнутий был преемником заветов Преподобного Сергия и деятельным представителем его иноческой школы.

Юный Даниил поступил в Боровскую обитель еще при жизни преподобного Пафнутия, который как великое светило сиял тогда святостью своей жизни и духовными дарованиями. Устройство монастыря было общежительным. Игумен подавал пример братии. Они видели «труды и злострадания, подвиги же и посты, и худость ризную, твердую к Богу веру и любовь, и еже к Пречистой Богородице известную надежду, Ея же и всегда имеяше упование в уме во устех языку пишу. Сего ради и благодати Божия сподобися, еже хотящая быти прозирати и сердечные тайные помыслы братии поведати, еше же и болезни исцеляти, и Бога и Пречистая Богородицы, приимаше, и бяше во истину далече от человек [тогдашнего] века всеми обычаями. Бяше же щедр и милостив, егда подобает; жесток же и напрасен, егда потреба»,- говорит преподобный Иосиф, будущий основатель Иосифо-Волоцкого монастыря, в одно время подвизавшийся с преподобным Давидом. Этим примером и богомудрыми советами руководствовался Давид в прохождении жития иноческого. Видя ревность и усердие своего послушника, преподобный Пафнутий совершил над ним монашеский постриг и нарек Давидом в честь преподобного Давида Солунского, святого отшельника, жившего в VI веке.

После преставления своего учителя, преподобного Пафнутия, преподобный Давид нашел духовное руководство и покровительство в лице великого светильника русского монашества преподобного Иосифа Волоцкого. Преподобный Иосиф двадцатилетним юношей пришел в Боровск и 13 февраля 1460 года, приняв монашеское пострижение от руки преподобного Пафнутия, семнадцать лет жил с ним в одной келье. Блаженный старец, провидя близкое свое отшествие ко Господу, предложил Иосифу быть его преемником по управлению обителью. Преподобный Пафнутий преставился 1 мая 1477 года. После него Иосиф управлял обителью с 1477 по 1479 год. Он намеревался ввести в Боровской обители самое строгое общежитие, но встретил несогласие на то со стороны иноков, кроме семерых, поэтому удалился от ропота и оставил на время свою обитель, чтобы лично осмотреть устройство других монастырей.

По возвращении из своего путешествия он решился навсегда покинуть Пафнутиев монастырь и основать обитель по своему желанию,  для чего с семью преданными ему иноками удалился в знакомые леса волоколамские, где основал свою знаменитую обитель, в которой и скончался 9 сентября 1515 года. Духовную связь с этим великим и просвещенным подвижником преподобный Давид не прерывал до самой его смерти. Продолжительное время подвизался преподобный в Пафнутиевой обители.

В 1515 году преподобный Давид, подвизавшийся более сорока лет в Боровском монастыре, оставил сию святую обитель, дабы основать свой монастырь в пустынной местности на берегу реки Лопасни в древней Хатунской волости, куда и пришел 31 мая 1515 г. с иконою Знамения Богоматери с двумя монахами и двумя послушниками. Поселившись здесь, он поставил кельи, возвел первые деревянные храмы в честь боголепного Вознесения Господа Бога и Спаса нашего Иисуса Христа с приделом в честь Успения Пресвятой Богородицы и Святителя и чудотворца Николая с трапезою. Около своей пустыни преподобный насадил липовую рощу. Преподобный Иосиф 15 августа 1515 года, незадолго до своей кончины, посетил эту новую обитель, трапезовал с преподобным Давидом и братией и наставлял их в Слове Божием.

19 сентября 1529 года он предал Богу свою праведную душу. Честное тело его было погребено в основанной им пустыни.

Почитание преподобного Давида началось вскоре после его праведной кончины. В синодике 1602 года он именуется преподобным, а в документах 1657 года, кроме того, и чудотворцем. Записей о чудесных явлениях милости Божией по молитвам преподобного не сохранилось. Но о том, что эти явления были, свидетельствуют рассказы жителей окрестных селений.

Серпуховской купчихе Окороковой, страдавшей весьма трудными родами, преподобный Давид явился во сне и обещал исцеление, если она посетит его обитель и отслужит при раке его панихиду. По благополучном разрешении от бремени благодарная женщина была в пустыни и рассказывала служившим панихиду о дивном ей явлении преподобного.

В 50-х годах ХIХ столетия в бытность свечником Давидовой пустыни старца высокой духовной жизни иеродиакона Венедикта пришел в обитель крестьянин Подольского уезда и просил отслужить панихиду по преподобном Давиде. Служившему иеромонаху крестьянин рассказал следующее: «Около семи лет страдал я расслаблением и без посторонней помощи не мог ни двинуться, ни приподняться.

Почти наяву явился мне преподобный Давид, высокий седой старец, в монашеском одеянии с посохом в руках, и приказал идти в Давидову пустынь, отслужить по нем панихиду, обещая исцелить меня от болезни. «Батюшка, – говорю – с радостью бы пошёл, но не только идти, а и приподняться не могу, да и не знаю, где эта пустынь». Старец ударил меня по ногам жезлом, велел идти в Подольск и стал невидим. Тут я, к великой радости, почувствовал возможность двигать членами, хотя на ноги встать не мог, и решил идти по повелению, о чем и объявил домашним. Невзирая на уговоры сына и других родных отложить это намерение, стал собираться в путь. Наскоро приладили костыли, хотя и не мог ими пользоваться за невозможностью встать на ноги. Сын проводил меня до деревенской околицы, все расстояние до которой я полз с великим трудом.

Тут сделалось что-то такое, будто всего меня прострелило, и я почувствовал, что силы мои крепнут, попробовал стать на ноги и – чудо! – с помощью костылей встал уже и пошел, хотя еле-еле, на ногах. Чем дальше шел, тем силы больше укреплялись. Под Подольском добрые люди рассказали, как найти дорогу в пустынь. И вот с Божией помощью, молитвами батюшки, преподобного Давида, и в пустынь дошел, и в костылях уже более не нуждаюсь».

Престарелой девице-дворянке из Подольского же уезда явился преподобный Давид и говорит: «Что ко мне не побываешь?» Явившийся стал невидим, а девица недоумевала, кто бы это мог быть. Вскоре ей пришлось быть в Москве и зайти в часовню Спасителя, принадлежащую Давидовой пустыни. Случайно увидав тут печатное изображение преподобного Давида, она узнала в нем явившегося и стала спрашивать, чье это изображение? Когда ей было сказано служащими при часовне, что это изображение основателя Давидовой пустыни преподобного Давида, она рассказала о явлении ей, узнала о дороге в пустынь и, действительно, вскоре приехала в монастырь и, отслуживши панихиду, рассказывала всем о бывшем ей явлении.

Более пятидесяти лет подвизался в монашестве преподобный Давид, стяжал многие духовные дарования и был, как говорит летопись, «отцом и кормильцем всего окрестного населения». Память его совершается (по новому стилю) 2, 31 октября и  23 мая (обретение мощей).

Тропарь, глас 4:

Возне́слся еси́ смире́нием свои́м над ми́ром, о́тче Преподо́бне,/ доброде́тельми победи́в злоко́зненнаго врага́,/ чистото́ю жития́ просия́в, я́ко со́лнце второ́е,/ мно́гия лю́ди ко спасе́нию приводя́./ Те́мже моли́ Христа́ Бо́га, Преподо́бне о́тче наш Дави́де,/ дарова́ти нам мир и ве́лию ми́лость,// и спасе́ние душа́м на́шим.