С самого начала возрождения Свято-Донского монастыря Господь послал для укрепления нашей веры святыни, к которым и поныне в обитель стекается множество людей, ищущих спасения своей души. 

Донская икона Божией МатериВ 1995 году казаки станицы Гниловской подарили монастырю большую Донскую икону Божией Матери.

Икона была торжественно перенесена в посвященный ей храм. С этой святыней по двунадесятым праздникам проходят крестные ходы вокруг монастыря.

В 1998 году один из молитвенников о возрождающейся обители схиархимандрит Зосима (Сокур, +29.08.02 г.) из Свято-Успенского монастыря Донецкой епархии подарил монастырю малый мощевик с 34 частицами святых.

Малый мощевик с 34 частицами святыхВ нем находятся частицы мощей Иоанна Предтечи, святого апостола Андрея Первозванного, равноапостольной Марии Магдалины, мученицы Татианы, великомученика Пантелеимона, Максима Грека и многих других. Малый мощевик находится в алтаре храма Донской иконы Божией Матери.

Незадолго до своей кончины в 2002 году батюшка Зосима благословил монастырю еще одну великую святыню: большой мощевик, в котором более 90 частиц мощей преподобных отцов Киево-Печерской Лавры, а также частица Голгофского камня. Большой мощевик находится в храме Донской иконы Божией Матери.

90 частиц мощей преподобных отцов Киево-Печерской ЛаврыВ Свято-Донском храме имеются также иконы с частичками мощей покровителя Донской земли святителя Димитрия Ростовского, свт. блг. князя Александра Невского, муч. Трифона, икона святителя Николая архиепископа Мир Ликийских чудотворца. 

Святитель Димитрий РостовскийСравнительно недавно в Старочеркасском мужском монастыре появилась икона почитаемого в России свт. Луки Крымского с частичками мощей.

28 сентября 2014 года в Свято-Донской Старочеркасский мужской монастырь была привезена икона святой Людмилы, княгини Чешской, с частицей её честных мощей. Написание и оформление образа святой Людмилы, княгини Чешской, стало возможным благодаря совместным усилиям и стараниям братии монастыря и посильным пожертвованиям православных верующих. Икону написал мастер-иконописец из г.Ростова-на-Дону Александр Дмитриевич Лысак. Написанная икона обладает некоторыми особенностями. Перед ее написанием были тщательно изучены исторические источники, описывающие стиль одежды славянских народов Балкан и варианты украшений женщин, принадлежавших к княжескому роду в X-XII веках.

Икона святой Людмилы, княгини ЧешскойНа основании изученного материала было решено на иконе изобразить образ святой в славянском княжеском головном украшении с традиционными височными серьгами. В указанный исторический период употреблялись также и шейные украшения, которые имели разные названия и формы. В данном случае для иконы святой мученицы была сделана объёмная подвеска, изготовленная из серебра с позолотой, жемчуга и чешских гранатов. Эта подвеска - не просто украшение, а непосредственно мощевик, в центральный медальон которого и была вложена частица святых мощей княгини Людмилы Чешской. На двух боковых медальонах финифтью изображены архангелы в стиле балкано-византийской иконографии X-XII веков. В правой руке святой Людмилы изображается шестиконечный крест как символ исповедничества и мученичества за веру Христову, а в левой – храм (в стиле балканской архитектуры).

Для подтверждения подлинности частицы мощей святой угодницы, которые находятся в иконе, на её обратной стороне с помощью современных лазерных технологий была нанесена грамота архиепископа Георгия (Православная Церковь Чешских земель и Словакии), подтверждающая передачу частицы честных мощей и их происхождение из Праги.

В России иконы святой мученицы Людмилы, княгини Чешской, есть в Москве и Подмосковье. И вот теперь икона Людмилы Чешской выставлена для молитвенного почитания всех желающих в Свято-Донском Старочеркасском мужском монастыре.

Икона святой Людмилы, княгини ЧешскойВ 2015 году, в праздник Святой Троицы, в Свято-Донскую обитель была торжественно принесена еще одна икона Святителя Николая Мир Ликийских чудотворца XVIII века, восстановленная трудами братии монастыря. Оклад XVIII века отреставрирован чеканкой по меди с посеребрением. К этой иконе благотворителем обители был подарен мощевик в форме архиерейской панагии, изготовленный донским ювелирным мастером. Частица мощей была привезена из Венеции благодаря усилиям меценатов Донской митрополии и вмонтирована в панагию. Икона святителя Николая чудотворца сейчас также выставлена в Воскресенском соборе. 

Летом 2014 года под сводами Войскового Воскресенского собора появились мощи свт. пророка Предтечи и Крестителя Господня Иоанна. Они были привезены усилиями братии монастыря и семьи благочестивых прихожан и вмонтированы в серебряный мощевик.

Также в 2015-2016 годах в Войсковом Воскресенском соборе появились новые святыни: специально написанная для монастыря большая икона - Собор святых целителей и восстановленная икона великомученицы Параскевы, нареченной Пятница, с частицей мощей.

Одними из последних икон, появившихся в монастырском храме Донской иконы Божией Матери можно назвать иконы с частицами мощей Ярославских святых, Софрония Иверского, Илариона Троицкого, Патриарха Тихона, Марии Гатчинской.