Главной святыней Рождественской оби­тели была Тихвинская икона Пресвятой Богородицы. В XIX веке икона находи­лась в иконостасе Рождественского собо­ра, по левую сторону Царских врат. Осо­бое почтение к чудотворным иконам как в Византии, так и на Руси выражалось в их украшении драгоценным убором, кото­рый становился неотъемлемой частью святого образа. На Тихвинской иконе был богатый оклад из позолоченного серебра, украшенного жемчугом с изумрудами, яхонтами, бриллиантами, аметистами и другими драгоценными камнями. Кроме основного оклада имелись еще две сереб­ряные позолоченные ризы. К нижнему полю прикреплялась пелена с изображе­нием Тихвинского образа, вышитая золо­тыми, серебряными и шелковыми нитями. В 1899 году была устроена на чудотворный образ Тихвинской Божией Матери риза, вся усыпанная жемчугом и драгоценными камнями. Именно с Тихвинским чудотворным образом настоятельницы обители встречали архиереев и других именитых гостей, посещавших обитель.

В XVIII-начале XX века в Ярославской и Ростовской епархии Тихвинская икона из Рождественского монастыря почита­лась наравне с главной святыней Ростовского кафедрального Успенского собора — Владимирской иконой Пресвятой Богородицы. В древнем Ростове было несколько особо чтимых икон, но только с двумя из них, Владимирской и Тихвинской, совершались многодневные крестные ходы из Ростова в Ярославль. На иконах избранных ростовских святых часто встречается моление святых перед теми же иконами.

Крестные ходы с Тихвинской иконой в Ярославль были очень многолюдны. Ког­да начались эти народные шествия со свя­тыней Рождественской обители — неизве­стно. В 1736 году архиепископ Ростовский Иоаким крестный ход с Тихвинской ико­ной отменил, но благодаря настойчивости игумении Евдоксии через шесть лет, в 1742 году, крестный ход был возобновлен.

Крестный ход с чудотворной Тихвин­ской иконой Божией Матери отправлялся 1 августа и возвращался в Ростов 8 сентября, к престольному празднику Богородице-Рождественской обители. После Божественной литургии и молебна у Тихвинского образа крестный ход шел в Успенский собор, где совершался молебен. Затем крестный ход шел на озеро Неро для водоосвящения, совершаемого в этот день. После этого икону провожали в село Никола-Перевоз. В последующие дни крестный ход по пути в Ярославль останавливался в селах Макарово и Шопша.

В Ярославле после Божественной литур­гии в Никольском храме икону общего­родским крестным ходом переносили в ярославский кафедральный Успенский со­бор, где она находилась до 26 августа. В эти же дни ее носили по домам жителей Ярославля. С 26 по 30 августа чудотворная ростовская святыня пребывала в ярослав­ской Предтеченской церкви, а затем крест­ный ход шел с иконой обратно в Ростов, но не по большой дороге, а по проселочным, с заходом в села Лучинское, Высокое, Бурмасово, Еремейцево, Заячий холм, Унимерь, Старокобыльское, Великое село. 7 сентября крестный ход с Тихвинской иконой встречали в Ростовском Белогостицком монастыре. Возвращалась святыня в свою обитель к престольному празднику Рождества Пресвятой Богородицы — после ранней Литургии в Белогостицком монастыре крестный ход с иконой шел в Рождественскую обитель к поздней Литургии.

Во время большого крестного хода со святыней Богородице-Рождественской обители во всех селах священнослужители и жители встречали икону крестными ходами; в домах многих жителей совершали молебны перед чудотворным образом.

В шествии с ростовской Тихвинской иконой была одна особенность: в начале крестного хода, после службы в Успенском соборе, икону несли на озеро Неро (в летописях его называют Ростовским озером) для водоосвящения. В этом отражается историческая связь с чудотворной иконой, которая явилась на водах реки Тихвинки. Лиддская икона, с которой отождествлялась чудотворная Тихвинская, по воде совершала свои «хождения» из Византии в Рим и обратно. Сохранилась фотография водоосвящения на озере Неро во время крестного хода с Тихвинской иконой Божией Матери.

Ростовская святыня являлась списком с чудотворного Тихвинского образа (праздник 26 июня / 9 июля) — одной из наиболее почитаемых на Руси икон Божией Матери, святыни Тихвинского Свято-Успенского монастыря Новгородской епархии.

Воскресенская и Никоновская летопи­си, а также Сказание о Тихвинской иконе, составленное на рубеже ХV-ХVI столе­тий, сообщают, что икона явилась летом 1383 года рыбакам над водами Ладож­ского озера в окрестностях Новгорода. Икона несколько раз переходила с одного места на другое, наполняя земли благода­тью, исцеляя людей и освящая места бу­дущих храмов. Наконец она останови­лась на берегу реки Тихвинки. Там для нее была сооружена церковь Успения Пресвятой Богородицы, а в 1560 году был устроен Тихвинский Свято-Успенский мужской монастырь.

С середины XVI века Тихвинский образ стали отождествлять с Лиддской иконой Пресвятой Богородицы (их иконография одинаковая). Лиддская икона Богоматери была написана в VIII веке с Нерукотворенного образа Божией Матери, явившегося на столпе храма в городе Лидде (недалеко от Иерусалима). Во времена иконоборческой ереси она чудесным образом приплыла в Рим из Константинополя и стала называться Римской, а после восстановления иконопочитания вернулась назад.

По другому преданию, Тихвинская ико­на отождествлялась с Влахернским обра­зом Одигитрии, написанным евангелис­том Лукой. Лиддский образ Пресвятой Богородицы и Одигитрия из Влахернского храма покинули Константинополь за 70 лет до падения Византийской империи в 1453 году. Лиддская икона, как и Одиги­трия из Влахернского храма, чудесным образом была перенесена из страны, ут­ратившей благочестие, в новый удел Пре­святой Богородицы — во Святую Русь. Русское государство рассматривалось как преемник духовных традиций Рима и второго Рима — Византии. Москва, проси­яв благочестием, стала третьим Римом, а четвертому не бывать — идея, выска­занная псковским монахом Филофеем, была распространена в XVI веке. Тихвин­ская икона стала символом Русского цен­трализованного государства. К всеобще­му почитанию Тихвинской иконы при­соединялось и почитание ее как храни­тельницы северо-западных рубежей Ру­си. В 1617 году в деревне Столбово, расположенной рядом с Тихвинским монастырем, был заключен Столбовский мир, прекративший войну между Россией и Швецией. Основание Петербурга, победа России в Северной войне со Швецией также связывали с верой в заступничество Божией Матери по молитвам перед Ее Тихвинской иконой.

Чудотворная икона была вывезена из Тихвина и из страны в 1941 году. С 1949 года икона находилась в Чикаго, а в июне 2004 года была возвращена в Россию и находится в соборе Тихвинского Успенского монастыря.

Когда появился Тихвинский образ Пре­святой Богородицы в Ростове — неизвестно, и едва ли когда-то мы узнаем доподлинную историю его появления здесь.

В Рождественской обители не существо­вало никакого предания о появлении здесь Тихвинской иконы. Поэтому первый исследователь истории Рождественского монастыря, отец Аристарх Израилев, в се­редине XIX века высказал предположение о том, что икона могла быть благослове­нием основателя обители святителя Феодора и написана им с чудотворного Тих­винского образа, который только что, в 1383 году, явился на реке Тихвинке.

Есть основания высказать еще одно предположение. История почитания Тих­винской иконы в Рождественском монас­тыре вXVIII-XIX веках известна. О том, что икона была в обители и особо почи­талась и в XVII столетии, говорит нали­чие пелен XVIIвека, выполненных в технике лицевого шитья и предназначавшихся для украшения чтимой иконы. Эти пелены хранятся в Ростовском музее.

Вероятнее всего, ростовский список с Тихвинской иконы был принесен из Тихвина, где в иконописной мастерской Тихвинского монастыря писали большое количество точных списков с чудотворной иконы.

В Ростовском музее хранится жемчужная риза с чудотворной иконы. Сохранились и два списка с нее, находившиеся прежде в обители, а в настоящее время пребывающие в ростовском храме во имя святителя Николая на Всполье (храм расположен на улице Гоголя).

Судьба почитавшейся в Рождественской обители Тихвинской иконы на сегодняшний день не известна.